骨髓涂片制片与阅片分析技术：标准化操作与精准诊断的关键
一、引言
骨髓检查是血液系统疾病诊断的金标准，而骨髓涂片制片与阅片分析技术直接影响诊断的准确性。高质量的制片可减少人工误差，精准的阅片分析能提高疾病检出率，尤其在白血病、骨髓增生异常综合征（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）等疾病的诊断中至关重要。
本文将系统介绍骨髓涂片标准化制片技术、显微镜阅片分析方法、常见问题及解决方案，并探讨AI辅助诊断等前沿技术的应用，为临床检验科、血液病专科及科研机构提供参考。
二、骨髓涂片标准化制片技术
1. 样本采集与处理
穿刺部位选择：成人首选髂后上棘（成功率高，疼痛轻），儿童可选胫骨或胸骨（需谨慎操作）。
抽吸量控制：0.2-0.5 mL，避免血液稀释（如抽吸量过多，可能导致骨髓液被外周血稀释，影响细胞比例评估）。
抗凝剂选择：推荐EDTA-K₂（优于肝素，减少细胞聚集和形态改变）。
2. 涂片制备
推片角度：30°-45°（角度过大易导致涂片过厚，过小则细胞分布不均）。
推片速度：匀速、快速，避免细胞堆积或断裂。
涂片厚度：以红细胞单层分布为宜（过厚影响细胞形态观察，过薄可能导致细胞数量不足）。
3. 染色优化
瑞氏-吉姆萨（Wright-Giemsa）染色（最常用）：
染色时间：瑞氏染液1-2 min → 缓冲液（pH 6.8）5-10 min → 流水冲洗。
关键点：染液新鲜配制，避免沉淀影响染色质量。
特殊染色（根据需求选择）：
铁染色（评估骨髓铁储存，诊断缺铁性贫血、MDS）。
PAS染色（辅助鉴别急性淋巴细胞白血病ALL vs. AML）。
4. 常见问题及解决方案
问题 | 可能原因 | 解决方案 |
涂片过厚 | 推片角度过大/速度过慢 | 调整角度至30°，加快推片速度 |
细胞破碎 | 推片压力过大/玻片不干净 | 轻柔推片，使用酒精清洁玻片 |
染色偏蓝 | 染液pH值偏低 | 调整缓冲液至pH 6.8 |
背景过深 | 染色时间过长 | 缩短染色时间，增加冲洗次数 |
三、骨髓涂片阅片分析技术
1. 显微镜观察流程
低倍镜（10×）扫描：
评估涂片质量（细胞分布、染色情况）。
观察骨髓增生程度（按5级分级标准：极度活跃、明显活跃、活跃、减低、重度减低）。
油镜（100×）分析：
细胞分类计数（至少计数200个有核细胞，计算各系比例）。
形态学评估（如粒细胞核左移、病态造血、异常淋巴细胞等）。
2. 关键指标解读
粒红比（G:E）：正常2:1-4:1，增高见于感染、白血病，降低见于溶血性贫血、MDS。
巨核细胞计数：正常7-35个/涂片，减少见于再生障碍性贫血，增多见于原发性血小板增多症。
异常细胞筛查：
原始细胞（>5%需警惕白血病）。
浆细胞（>10%考虑多发性骨髓瘤）。
肿瘤细胞（如转移癌的成簇分布）。
3. AI辅助阅片技术
深度学习算法：自动识别细胞类型，提高计数效率（如MetaSystems、Sysmex DI-60）。
数字病理系统：支持远程会诊，减少人为误差。
局限性：仍需人工复核，尤其在疑难病例中（如低增生性MDS vs. 再生障碍性贫血）。
四、临床应用与案例分析
1. 白血病诊断
急性髓系白血病（AML）：原始细胞≥20%，Auer小体提示AML。
慢性淋巴细胞白血病（CLL）：成熟淋巴细胞增多，伴“涂抹细胞”。
2. 骨髓增生异常综合征（MDS）
病态造血（如粒细胞Pelger-Huet样核、红系巨幼样变）。
环形铁粒幼细胞（铁染色≥15%支持MDS诊断）。
3. 多发性骨髓瘤（MM）
浆细胞比例增高（通常>10%，伴异常形态）。
M蛋白检测（需结合血清蛋白电泳）。
五、总结与展望
骨髓涂片制片与阅片分析是血液病诊断的基石技术，其标准化操作直接影响临床决策。未来，AI辅助诊断和数字病理将进一步优化流程，但人工经验仍不可替代。
我们的服务：
标准化制片培训（含实操演练）。
疑难病例会诊（支持数字切片远程分析）。
全流程质控方案（从采样到报告）。
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上海睿远生物医药科技有限公司
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